产品特性Matrigel基质的色差变化(从淡黄色到深红色)主要是由于酚红和碳酸氢盐与CO2的反应导致的。不过,当与5% CO2平衡后,色差会显著减少。冻融后,轻轻摇晃试剂瓶可使Matrigel分散均匀。所有操作需在无菌环境中进行,试剂瓶瓶盖应使用70%乙醇擦拭后自然干燥。为了确保Matrigel呈现均匀的浆状,建议使用预冷的移液器进行操作。
细胞可以在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面进行生长,也可在1mm厚的Matrigel三维基质内生长。需要注意的是,过度稀释的Matrigel可能会形成非胶质的蛋白层,虽然可以用于细胞贴壁,但不适合用于细胞分化研究。同时,勿忘将冻融后的Matrigel分装于多个小管内,所有分装需用预冷的冻存管,并迅速冷冻和保存,以避免多次冻融的影响。
Matrigel在22-35°C的环境下会迅速成胶,因此在溶解时需在4°C冰上过夜以确保理想的冻融效果(在4度时,随着温度升高,Matrigel可能会部分成胶)。使用前,所有相关用品都需放置在冰浴中,确保使用预冷的移液管、吸头及小管进行操作。
经过成胶的Matrigel可以在24-48小时后恢复为液态。针对Matrigel的成胶及包被方法,建议稀释浓度不应低于1:3,且可使用无血清培养基进行稀释。Matrigel成胶后请尽快使用。
薄胶成胶方法
1. 冻融后,用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀,使其呈均匀的浆状。
2. 将需要使用的培养板放置于冰上,加入浓度为50μL/cm²生长面积的Matrigel基质。
3. 在37°C下放置30分钟,即可使用。
厚胶成胶方法
1. 冻融后,使用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质,使其呈均匀的浆状。
2. 将所需的培养板置于冰浴中,将培养的细胞与Matrigel基质混合,然后使用移液枪头使其悬浮于基质中,加入浓度为150-200μL/cm²生长面积的Matrigel基质。
3. 在37°C下放置30分钟,即可成胶,可以将细胞培养基加入胶中,或使细胞直接生长在胶表面。
薄层包被方法
1. 冻融后,使用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀,使其呈均匀的浆状。
2. 根据需要,采用无血清培养基稀释Matrigel基质,并根据实验需要确定最佳包被浓度。
3. 将稀释后的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中,包被量至少需覆盖整个器皿的生长表面,并在室温下孵育1小时。
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