细胞系及细胞株的定义与建立

一、概念

1. 细胞系（Cell Line）

细胞系是指原代培养在首次传代成功后形成的一类细胞，由原代培养物中存在的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。

2. 细胞株（Cell Strain）

细胞株是通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的细胞。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果无法继续传代或传代数有限，则称为有限细胞株（finite cell strain）；若可连续传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，在体外培养超过六个月，生长稳定并连续传代的可被称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

能够被认可为已鉴定细胞的体外培养群视具体情况而定，并无统一规定。对于原代培养的细胞，只需要供体均一、取材部位及组织种类等条件稳定。例如，用于长期培养，特别是反复传代的细胞常需说明以下几点：

1. 组织来源

细胞供体所属物种（来源于人体或动物）、性别、年龄以及取材的器官或组织。如为肿瘤组织，需说明临床和病理诊断以及病历号等信息。

2. 细胞生物学检测

应了解细胞的一般和特殊生物学特征，如细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数、倍增时间及接种率等。若为肿瘤细胞，需通过小琼脂培养、异体接种致瘤实验及正常组织侵润实验等方法，以确认其来源于原肿瘤组织并保持恶性。

3. 培养条件和方法

应详细说明细胞系（或株）所适应的生存环境，包括所使用的培养基、血清种类和用量，以及适宜的pH值。

三、细胞建立的要点及基本流程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材

材料主要来源于外科手术或活检瘤组织。取材时应避免使用坏死组织，挑选肿瘤细胞集中且活力良好的部位，如瘤性转移淋巴结或胸腹水。取材后应尽快进行培养，若不能立即培养，须进行冻存，培养与冻存方法同正常组织。

2. 成纤维细胞排除

肿瘤组织中常混杂有成纤维细胞，这些细胞能够与肿瘤细胞同时生长，可能会抑制癌细胞的生长。排除成纤维细胞的方法包括机械刮除法、反复贴壁法及胶原酶消化法等。

3. 提高肿瘤细胞存活率和生长率

根据实验经验，肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可传代的肿瘤细胞系更为挑战。通常情况下，肿瘤细胞在原代培养后需适应新环境，往往需要采用特殊措施，如使用适宜的底物（如鼠尾胶原底层），或者选用不同类型的细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等），有时也需考虑动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建立株的方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，添加2ml RPMI 1640，混匀后沿管壁缓慢加入预置有4ml淋巴细胞分离液的液面，静置30分钟。

2. 以1500rpm转动15分钟，吸取第二层白细胞层到另一离心管中。随后用RPMI 1640对白细胞进行两次洗涤，各添加5ml。

3. 将处理后的白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EB病毒液，混匀并在水浴摇床中以40次/分的速度搅拌，37℃培养3小时。

4. 以1500rpm离心15分钟后，将细胞接种至1ml含谷氨酰胺1mM/ml的培养基中，轻轻混匀后在37℃培养。

5. 观察细胞转化和生长情况，决定是否进行半量换液，通常进行1-2次半量换液，并保持环胞霉素浓度。

6. 待转化细胞数量明显上升并出现细胞团块后，可转入25ml细胞培养瓶中，加入1-2ml培养基，37℃培养10-15天，每隔3-4天观察一次，以决定是否换液或进行传代。

7. 当细胞生长达到一定数量后进行冻存，冻存之前应进行核型分析和存档。

结论

通过上述步骤与方法，可以有效建立和维护细胞系与细胞株，在生物医疗研究领域中发挥重要作用。俄罗斯专享会294致力于提供高质量的细胞培养解决方案，助力科研创新。