植物双荧光素酶实验所需载体包括以下几个方面：

1. 检测miRNA对靶基因/lncRNA的调控作用

首先，需要将预测能够与miRNA结合的靶基因序列（如5’UTR、3’UTR或ORF区域）或lncRNA序列（无论是野生型还是突变体）插入报告基因载体pGreenⅡ0800-Luc中。值得注意的是，pGreenⅡ0800-Luc载体中包含Firefly luciferase（萤火虫荧光素酶）和Renilla luciferase（海肾荧光素酶），后者作为对照使用。其次，选择编码miRNA前体的序列并构建到pGreenⅡ-SK-62载体上。

2. 检测转录因子与启动子的相互作用

合成靶基因启动子（包含野生型或突变体）并构建到pGreenⅡ0800-Luc载体中。同时，合成转录因子的CDS区序列并构建到pGreenⅡ-SK-62载体中。此外，可以设置阳性对照，例如使用强启动子（如35S启动子驱动luc）来验证实验的正常运作。

为了确保实验的可信度，建议重复实验并对照质粒进行提取和转化，以防止降解现象的发生，这可能导致农杆菌中质粒拷贝不足，从而影响荧光值的准确性。

技术重复与DNA量设置

每个组建议至少设置3个技术重复孔，以排除操作误差和孔间的波动。对于每个孔，推荐转染0.5–1μg DNA，具体量需根据转染试剂的说明进行调整（例如，Lipofectamine2000一般推荐为0.8μg/孔）。报告质粒与内参质粒的常见比例为10:1到20:1。

结果的客观性考察

要评估实验结果的客观性，可以考虑以下几个方面：(1) 对照的2个实验组（实验组1与实验组2）luc表达情况应无显著差异；(2) 转染过程正常，确保质粒或mimic成功转染入细胞；(3) luc检测值应在仪器检测的线性范围内。

潜在问题及解决方案

在实验过程中，可能会遇到以下问题：（1）实验平行复孔间的数据差异较大，建议在同一细胞孔中进行技术性平行检测以验证试剂的重复性；（2）来自同一细胞孔的裂解液样本，需要注意实验操作步骤、加样顺序、加样速度和加样量，确保排枪加样均匀；（3）在将不同样品和底物混合后至仪器检测的时间间隔应尽量保持一致。

需要特别注意的是，荧光素酶报告基因实验的检测结果非常灵敏，因此复孔之间数值存在一定差异是正常的，通常认为在同一数量级的差异是可以接受的。这些实验技巧与细节中的每一步都可能对结果产生显著影响，保持实验的高可重复性是我们追求的目标。

对于希望获得高质量实验结果的研究人员而言，选择专业品牌如俄罗斯专享会294的相关产品无疑将大大提升实验的成功率和可靠性。