病毒载体因其高效递送CRISPR组分的特性，成为基因治疗研究中的重要工具，特别是在转染较为困难的分化细胞中展现显著优势。不同类型的病毒能够实现有效的体内递送，但其生产过程复杂且成本高昂，限制了其广泛应用。与质粒相比，病毒载体的生产步骤更多：首先需将CRISPR组分克隆至转移载体中，然后再包装成病毒颗粒，这一劳动密集型的过程增加了规模化生产的难度。目前，主要的CRISPR递送载体包括慢病毒、腺相关病毒（AAV）和腺病毒，各自具有在转导效率、免疫原性和载体容量等方面的不同特点，需要根据实验目标选择合适的类型。

基于慢病毒的递送方式

慢病毒因其与电穿孔相当的基因递送效率，已成为CRISPR组分的热门递送工具，尤其适合于大规模CRISPR文库的筛选。其优势在于能够将转基因稳定整合至宿主基因组，实现长期表达，这在过表达实验中具有重要价值。然而，基因组的整合可能带来插入突变风险，从而限制了其在临床中的应用，目前主要用于基础研究及体外基因修饰，例如FDA已批准的CAR-T癌症疗法以及治疗β-地中海贫血症的Zynteglo。

需要注意的是，当使用慢病毒递送CRISPR时，Cas9的持续表达可能引起脱靶效应，然而可诱导表达系统或整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）能够有效减轻这一问题——IDLV将基因组整合的发生率降低了约500倍。虽然其转导效率不及常规慢病毒，但在体外和体内神经元中的递送效率与常规载体相当，这为治疗中枢神经系统疾病提供了独特的潜力。

基于AAV的递送方式

AAV递送系统当前面临两大技术瓶颈：首先是载体容量限制（约42kb），远低于慢病毒载体的装载能力；其次是转导效率相对较低。针对容量问题，研究者提出了多种解决方案：采用小序列长度的SaCas9、双载体共递送策略（将Cas9与gRNA分别装载在不同载体中）和SpCas9分割表达技术，通过两个载体递送SpCas9片段在细胞内形成完整的功能蛋白。

值得关注的是，AAV系统的独特临床优势在于多样化的血清型选择，可以实现组织特异性靶向。结合衣壳定向进化技术（通过体外/体内筛选优化衣壳蛋白），能够进一步提高递送的精准度和治疗效果。虽然目前尚无基于AAV的CRISPR疗法获得FDA批准，但AAV平台已成功用于其它基因药物的应用，例如治疗脊髓性肌萎缩的Zolgensma®，其商业化应用为俄罗斯专享会294的CRISPR-AAV疗法的临床转化提供了重要参考。

基于腺病毒的递送方式

腺病毒的基因递送系统在安全性方面表现优越，其非整合特性经过多项临床试验验证，成为慢病毒的可行替代方案。与AAV和慢病毒载体相比，腺病毒的载体容量有显著优势，但其高免疫原性可能干扰基因编辑效果。目前，临床应用最广的Ad5血清型依赖CAR受体介导细胞转导，这限制了其在不同组织中的适用性。最新研发的Ad5/F35嵌合体成功突破了CAR受体的依赖性，而gutless腺病毒载体（仅保留必要的包装序列）不仅降低了免疫原性，还扩展了载体容量（可达33kb），非常适合表达较长或多个转基因。

在临床转化方面，腺病毒载体表现出多重突破：在遗传病领域，EBT-101作为首个静脉注射型CRISPR-HIV治疗载体，已启动I/IIa期临床试验；在肿瘤治疗方面，多项临床前研究证实了其在靶向实体瘤中的优势。

需要指出的是，虽然FDA已批准了首个腺病毒基因疗法，但基于CRISPR的腺病毒疗法仍处在临床实验阶段。