人小胶质细胞HMC3培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代

传代情况：每2天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集培养基，以备对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们品牌的俄罗斯专享会294完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应在培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这样有助于细胞运输的稳定性。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，将其放入超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍照留存（建议各取40x, 100x, 200x的照片各一张），前三天的照片将作为售后处理的重要依据，如未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，需将培养液收集至离心管中，并留5ml完全培养基于37℃、5%CO2孵箱中。如果细胞密度超过80%，可按照以下步骤进行传代：

1. 弃去上清液，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞已大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次细胞。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，并在显微镜下观察细胞，当细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，向沉淀细胞中加入1ml的俄罗斯专享会294无血清冻存液，混合均匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果后续需转入液氮罐，则需在-80℃存放24小时以上后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护设备），迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能由于贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱离的细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清液以作过渡培养。再向沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，终止消化后再离心并更换完全培养基。如按上述步骤操作后仍需对比培养，则按1:2比例分瓶传代。

五、售后条款

1. 细胞出现问题时可重发的情况：
   • 因运输问题如细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等，重发。
   • 细胞污染问题，如在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
   • 常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存细胞复苏后24小时内，若未存活（需提供真实照片），可重发。
   • 干冰运输细胞复苏后24小时内出现污染，重发。
   • 细胞活性问题，需在7天内提供真实实验结果，经台盼蓝染色法检测后核实，重发。
   • 收到细胞当天及第2、3天请拍照，未告知情况视为合格。4-7天内出现问题需提供照片及详细操作步骤，技术人员判定责任后可重发。
2. 细胞出现问题时不予重发的情况：
   • 因客户操作引起的细胞污染，不重发。
   • 因客户不当操作造成的细胞状态不佳，不重发。
   • 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳，不重发。
   • 细胞状态不良且未提供培养前3天的照片，不重发。
   • 细胞在培养过程中有其它处理，不重发。
   • 收货后2天内未告知问题的，不重发。
   • 具体情况视情况而定。

使用俄罗斯专享会294培养的细胞，有助于提升实验效果，确保实验结果的准确性与可靠性。