俄罗斯专享会294的GPCR19激动剂（TGR5 Receptor Agonist）操作规程旨在为研究人员提供清晰的实验步骤，以评估该化合物在细胞实验中的效果。

实验步骤

1. 在96孔板中每孔加入100μL细胞悬液。对于细胞增殖实验，每孔应加入2000个细胞（100μL的1000个细胞浓度），而在细胞毒性实验中，每孔应加入5000～10000个细胞（具体数量应根据不同细胞类型的大小及增殖速率进行调整）。然后将96孔板置于37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养24小时。

2. 向每孔中加入适当浓度的0～10μL试验化合物。

3. 将96孔板放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中，保持100%湿度，孵育适当时间。

4. 准备5×MTT溶液并稀释为1×MTT溶液。

5. 向每孔加入50μL的1×MTT溶液，在37℃下孵育4小时，以使MTT被细胞还原为甲臜。

6. 吸出上清液，并向每孔加入150μL DMSO，使甲臜充分溶解，使用平板摇床摇匀。

7. 通过酶标仪在570 nm的波长下检测每孔的光密度（如没有570 nm的滤光片，也可以使用560-600 nm范围的滤光片）。

8. 结果分析：
a. 细胞存活率的计算：首先将每个测试孔的OD值减去背景OD值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD值（*培养基加不同稀释度的受试药物加MTT，无细胞）。对各重复孔的OD值取平均数并计算±SD。细胞存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。计算公式为：细胞存活率%=（加药细胞OD/对照细胞OD）×100。
b. 计算T/C=50%的药物浓度（IC50）和T/C=10%的药物浓度（IC90）。

本文档旨在为使用俄罗斯专享会294的研究者提供清晰可行的操作规程，确保实验的高效与准确。